常见问题解答

免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC），即免疫组化，是利用免疫学中抗原抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（如多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。 IHC实验流程：通常包括组织样本固定、石蜡包埋、切片、切片脱蜡水化、抗原修复、灭活、封闭、一抗孵育、二抗孵育、染色显色、复染、脱水、封片、观察步骤。

铁死亡（Ferroptosis）是一种铁依赖的程序性细胞死亡，由磷脂过氧化作用引起，磷脂过氧化是一个依赖于代谢产物活性氧(reactive oxygen species, ROS)、含磷脂的多不饱和脂肪酸链(phospholipid containing polyunsaturated fatty acid chain, PUFA-PL)和铁积累的过程。形态学上，铁死亡会引起细胞质膜破损及细胞质肿胀，超微结构上能够观察到线粒体形态紊乱等情况，并且细胞内和细胞间信号事件和环境应激可以通过调节细胞代谢和 ROS 水平来影响铁死亡。

在分子生物学实验中，qPCR（实时荧光定量PCR）和WB（Western Blot）堪称黄金搭档：一个检测基因转录水平（mRNA），一个验证蛋白表达量。但当两个实验结果“自相矛盾”时，科研人常常陷入困惑——到底是实验做错了？还是生物学现象另有玄机？今天Connie师兄带你揭开谜底！

蛋白质免疫印迹（Western blot，WB）是一种常规但是强大的蛋白检测方法，可用于研究翻译后修饰蛋白相对丰度、相对质量以及研究蛋白质-蛋白质相互作用，从诞生以来为学术研究、诊断和治疗测试提供了有价值的参考。WB通过凝胶电泳分离天然或变性蛋白质，转移到膜上并可以保持多肽类型和生物学活性不变，用特异性抗体识别和定量从细胞或组织裂解液中提取的复杂混合物中的特定蛋白质。

按照国际规则，生物安全实验室按等级划分，按照研究对象的危险程度分为四类：BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4。BSL等级越高，意味着防护级别越强，就能研究具有更大传染性和危害性的病原。

我们知道高温高压灭菌是最常用的灭菌方法，121°C，15-20min 是这一过程中最常用的标准条件。高压灭菌器最早问世于1879年，当时是通过压力表来控制灭菌过程，灭菌的条件用的是压力单位，一般国内用1 kg/cm2表示，相当于1个标准大气压=1bar=1 kg/cm2=0.1 MPa=14.5 psi，常用的高压灭菌条件指的是2个大气压下水的沸点值，这个值接近121℃，那为何最后偏偏选了121而不是120或者122℃呢？实际上是因为美国使用的是华氏温度，灭菌时使用的温度是250℉，根据华氏度和摄氏度换算250℉=121.1℃。121°C就是这么得来的，那么你清楚高温灭菌的渊源吗？

呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus, RSV）是一种非节段性的单股负链RNA病毒，属于副粘病毒科（Paramyxoviridae），肺炎病毒属。RSV可在全球范围内引起婴幼儿、老年人和免疫功能低下者呼吸道感染，是5岁以下儿童下呼吸道感染的主要致病原因，每年导致约3300万例下呼吸道感染病例，其中中国约占十分之一，即350万例。RSV 感染在全球范围内的广泛流行，对 5 岁以下儿童和 65 岁及以上老年人造成了较重的疾病负担。

流感病毒属于正黏病毒科，为有包膜的负链RNA病毒，根据抗原特性可分为甲型、乙型、丙型和丁型流感病毒。其中对人类健康威胁最大的是甲型流感病毒。流感病毒在全球每年导致29万~65万例呼吸道疾病相关死亡。

登革热病毒（Dengue Virus, DENV）属于黄病毒科中的黄病毒属，是一种核糖核酸（RNA）病毒。黄病毒属包括西尼罗河病毒 (WNV)、日本脑炎病毒 (JEV)、蜱传脑炎病毒 (TBEV) 和黄热病毒 (YFV)。登革热病毒通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播，引发从轻度的登革热（DF）到致命的登革出血热（DHF）或登革休克综合征（DSS）。DENV主要分为四种血清型（DENV 1-4），不同血清型的抗原性略有不同。病毒基因组由约 11kb的单股正链RNA组成，编码3种结构蛋白（C、prM和E），这些蛋白构成病毒体的组成部分，以及7种参与病毒RNA复制的非结构蛋白（NS1、NS2A/B、NS3、NS4A/B、NS5）。

一抗，即第一抗体，是一种能够与非抗体性抗原（即特异性抗原）特异性结合的蛋白，主要分为单克隆抗体和多克隆抗体两大类。一抗可以特异性地结合底物，识别出我们想要检测的蛋白。检测任何靶蛋白都有多种抗体可供选择，那如何进行一抗的选择呢？